PCR檢測試劑盒使用時有哪些地方是需要我們注意的？
PCR檢測試劑盒利用DNA擴增的線性原理，可以測定樣品中已知序列的絕對或相對量。qPCR會監(jiān)測每個PCR循環(huán)中的DNA擴增。當DNA處于對數(shù)線性擴增階段時，熒光量相對于背景增加。熒光積累至可測的那一點稱為閾值循環(huán)(CT)或交叉點。通過使用已知量的標準DNA的多次稀釋，可以產(chǎn)生對比CT的對數(shù)濃度的標準曲線。然后可以從其CT值計算未知樣品中DNA或cDNA的量。適用于多色熒光PCR儀。
PCR檢測試劑盒的使用注意事項：
1.實驗前請仔細閱讀檢測試劑盒說明書，嚴格按步驟執(zhí)行，不使用檢測試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導致錯誤結果。
2.所有試劑應在規(guī)定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應充分混勻。試劑盒反復凍融次數(shù)不宜超過5次。
3.實驗操作應按照國家有關臨床基因擴增實驗室管理規(guī)范執(zhí)行，實驗過程應分區(qū)(試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增區(qū))，各區(qū)物品為專用，不得交叉使用，避免污染。
4.操作臺、移液器、離心機等儀器用品應經(jīng)常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應進行無酶處理。
5.待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質(zhì)處理方法進行處理。
6.為防止熒光干擾，應避免使用含熒光物質(zhì)的手套，避免用手直接接觸，預防交叉污染。
7.檢測結果為陰性，并不*代表為非感染狀態(tài)，具體診斷需結合獸醫(yī)臨床。
8.產(chǎn)生假陰性的可能原因為：待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當造成DNA降解；樣本中核酸濃度低于z低檢測限；病毒待測靶基因出現(xiàn)變異；未經(jīng)驗證的其他干擾因素。
9.產(chǎn)生假陽性的可能原因為：待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發(fā)生交叉污染。
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